]*>","")" /> Prokaryotic Expression and Preparation of Polyclonal Antibody TNF-α from Karakul Sheep
Xinjiang Agricultural Sciences

• Article • Previous Articles     Next Articles

Prokaryotic Expression and Preparation of Polyclonal Antibody TNF-α from Karakul Sheep

PAN Yi-wei;HE Yan-yan;Pan hui;JIA Shan-ling;LI Lian-rui   

  • Received:2013-03-25 Revised:2013-03-25 Online:2013-03-25 Published:2013-03-25

新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备

潘伊微;贺艳艳;潘辉;贾山岭;李莲瑞   

  1. 塔里木大学生命科学学院,新疆阿拉尔,843300;塔里木大学动物科学学院 新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室 新疆阿拉尔843300





摘要： [目的]克隆卡拉库尔羊TNF-α基因,在大肠杆菌中表达、纯化,并对TNF-α蛋白的抗原性进行分析.[方法]采用PCR技术扩增TNF-α基因核酸片段,并克隆入pET-28b表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)株中表达.用电洗脱法纯化目的蛋白,并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性.[结果]重组质粒在BI21 (DE3)菌株中经IPTG诱导表达一个相对分子质量约为49 KD的融合重组蛋白,原核表达质粒pET-28b-TNF-α表达的目的融合蛋白是以可溶的形式存在.用纯化的pET-28b-TNF-α免疫家兔,在免疫后的第45 d,Westem-blotting和琼脂糖扩散试验分析表明,表达的pET-28b-TNF-α能被家兔的阳性血清所识别.[结论]表达蛋白pET-28b-TNF-α具有较好的反应原性和免疫原性.