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Xinjiang Agricultural Sciences

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Optimization of CAPS -PCR Reaction System in Processing Tomato

WANG Bai-ke;Patiguli;YANG Sheng-bao;YANG Tao;ZHANG Gui-ren;YU Qing-hui   

  • Received:2011-09-25 Revised:2011-09-25 Online:2011-09-25 Published:2011-09-25

加工番茄CAPS遗传标记反应体系的优化

王柏柯;帕提古丽;杨生保;杨涛;张贵仁;余庆辉   

  1. 新疆农业科学院园艺作物研究所,乌鲁木齐,830091





摘要： [目的]以加工番茄M82、IL7 1-5为材料,研究加工番茄CAPS分析中PCR反应体系的主要成分对CAPS扩增结果的影响.[方法]以公开发表并检验稳定的CAPS标记c2_at5g20180为引物,PCR反应采用25 μL反应体积,含模板DNA 100 ng,2.5 UTaq DNA聚合酶,1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmool/L dNTPs,0.15μmmol/L引物.在保持其它因素一致的条件下,通过5个梯度,变化单一因子,筛选最优参数.反应程序为:94℃预变性3 min；94℃变性40 s,55℃退火40 s,72℃延伸90 s,共37个循环,最后72℃延伸10 min,4℃保存产物.[结果]通过体系优化,成功扩增出清晰稳定的PCR产物.[结论]在总体积为25 μL的PCR反应中,含50 ng模板DNA,0.75 UTaq DNA聚合酶,Mg2+终浓度为1.5 mmol/L,dNTP浓度为0.16 mmol/L,引物浓度为0.2 μmol/L时效果最好.