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Xinjiang Agricultural Sciences

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Optimization of Prokaryotic Expression of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) N Gene and Its Protein Purification

Shanawaer Taxi;WANG Chuan-feng;Maintaitiaili Sidike;ZHANG Wei;RAN Duo-liang   

  • Received:2011-06-25 Revised:2011-06-25 Online:2011-06-25 Published:2011-06-25

PRRSV新疆株N基因原核表达条件的优化及蛋白纯化

沙娜瓦尔·塔希;王传锋;买买提艾力·斯迪克;张伟;冉多良   

  1. 新疆维吾尔自治区动物卫生监督总站,乌鲁木齐,830063;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052;伊犁职业技术学院,新疆,伊宁,835000;新疆维吾尔自治区动物卫生监督总站,乌鲁木齐,830063;新疆天康畜牧生物技术有限公司,乌鲁木齐,830000;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐,830052





摘要： [目的]获得重组表达质粒pGEX-6P-N在大肠杆菌BL21中高效表达,分析表达蛋白的免疫学活性及纯化后蛋白的浓度.[方法]通过优化诱导剂终浓度和诱导时间来实现融合蛋白的高效表达,使用BCA法测定蛋白浓度,利用Western blotting分析融合蛋白的免疫学活性.[结果]融合蛋白在37℃条件下,经终浓度为1.2 mmol/L的IPPG诱导表达4.5 h后获得了较高的表达水平.纯化后的融合蛋白经BCA法测定蛋白浓度达到0.587 mg/mL.Western blotting试验表明,GST-N蛋白能与抗PRRSV阳性血清发生特异性反应.[结论]为建立N特异性抗体的间接ELISA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础,为新疆PRRS的防控提供了理论支持.