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Xinjiang Agricultural Sciences

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The Construction of the DDRT- PCR System on Gossypium barbadense Tissue Culture

DAI Xin;CHEN Quan-jia;GAO Wen-wei;QU Yan-ying   

  • Received:2010-09-25 Revised:2010-09-25 Online:2010-09-25 Published:2010-09-25

海岛棉组培mRNA差异显示体系的建立

代鑫;陈全家;高文伟;曲延英   

  1. 新疆农业大学农业生物重点技术实验室,乌鲁木齐,830052





摘要： [目的]建立适合海岛棉组织培养过程中差异基因表达研究的DDRT-PCR体系.[方法]试验选取海岛棉体胚发育过程中的胚性愈伤组织,无菌苗下胚轴为对照.对引物浓度、dNTP浓度、酶浓度和退火温度等影响差异显示PCR的关键因素进行单因素优化实验.[结果]确定了海岛棉组织培养差异显示PCR体系为(10 μL):cDNA 2 μL;dNTP 200 μmol/L;上游引物0.4 μL(10 μM),下游引物0.5 μL(10 μM);Taq酶0.5 U,Buffer1.0 μL.前5个循环退火温度为50℃,后30个循环退火温度为57.1℃.[结论]用该体系扩增,PCR产物特异性高,条带清晰,背景污染少.