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Xinjiang Agricultural Sciences

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Expression of the Paecilomyces sp.FLH30 endo β-1, 3 (4)Glucanase Gene in Pichia pastoris

HU Wei;ZHANG Hui-ling;WEI Huan;FU Ting-ting;CHEN Yong;WU Yun   

  • Received:2016-09-25 Revised:2016-09-25 Online:2016-09-25 Published:2016-09-25

源于Paecilomyces sp. FLH30内切β-1,3(4)葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

胡玮;张慧玲;魏欢;付婷婷;陈勇;武运   

  1. 新疆农业大学动物科学学院/新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室,乌鲁木齐830052;新疆农业大学食品科学与药学学院,乌鲁木齐830052;新疆农业大学动物科学学院/新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学食品科学与药学学院,乌鲁木齐,830052

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摘要： [目的]β-1,3(4)-葡聚糖酶是一种重要的工业用酶,广泛地应用于饲料业、酿造业及纺织业.[方法]以来源于Paecilomyces sp.FLH30的葡聚糖酶基因为研究对象.据毕赤酵母GS115对密码子的简并性和偏爱性,对来源于淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)β-1,3(4)-葡聚糖酶基因进行了优化,通过全基因技术合成了全长基因GLUnm并构建重组酵母表达载体pPIC9K-GLUnm,用SacI线性化重组质粒pHC9K-GLUnn,电击转化至毕赤酵母GS115中进行表达.[结果]通过表型筛选,遗传霉素抗性筛选,经PCR鉴定表明,葡聚糖酶基因整合至酵母染色体DNA中.在试管中经甲醇诱导表达,并测定葡聚糖酶酶活性.在试管水平表达的酶活性是0.68 IU/mL,即可以认为在摇瓶表达水平的初始酶活性为0.68 IU/mL,将此菌株在摇瓶水平表达,酶活性在表达84h为最高,是11.26 IU/mL.[结论]重组β-1,3(4)-葡聚糖酶的最适pH为5.0,最适反应温度为50℃,在pH 5.0 ～8.0,温度37～50℃的条件下较稳定.