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Xinjiang Agricultural Sciences

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PCR Detection of Two Phytoplasma and Optimization of Reaction System

MA Chun-chun;ZHANG Xiang-lin;QIAN Yi-ke;WANG Chong   

  • Received:2009-03-25 Revised:2009-03-25 Online:2009-03-25 Published:2009-03-25

两种植原体的PCR检测及其体系优化

马春春;张祥林;乾义柯;王翀   

  1. 新疆出入境检验检疫局,乌鲁木齐,830063;新疆农业大学农学院,乌鲁木齐,830052;新疆出入境检验检疫局,乌鲁木齐,830063





摘要： 用已报道的植原体通用引物对葡萄黄化病和枣疯病植原体进行常规PCR及巢式PCR检测,并对PCR反应体系进行优化.结果表明:常规PCR扩增出了1.5 kb的特异片段,所需PCR模板DNA用量为20 ng/μL;在PCR基础上的巢式 PCR扩增出1.2 kb的特异片段,所需PCR模板DNA用量为2 pg/μL.检测灵敏度提高约10 000倍.优化试验表明:25 μL反应体系中,MgCl2用量对扩增效果影响最大.最终最佳反应体系确立为:25 mM MgCl21.7 μL,2.5 mM dNTP 1.8 μL,5U/μL Taq酶可选用0.2 μL,10mM引物对各0.2 μL,最佳退火温度为45.0℃.