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Xinjiang Agricultural Sciences

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Cloning of Thermophilic Neutral Protease Gene and Expression of Pichia pastoris

WANG Wei;ZHANG Zhi-dong;MAO Jun;WANG Tao;XIE Yu-qing;TANG Qi-yong   

  • Received:2009-03-25 Revised:2009-03-25 Online:2009-03-25 Published:2009-03-25

高温中性蛋白酶基因的克隆及毕赤酵母表达研究

王玮;张志东;茆军;王涛;谢玉清;唐琦勇   

  1. 新疆农科院微生物所,乌鲁木齐,830091;南京工业大学制药与生命科学学院,江苏南京,210009





摘要： 对地衣芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶进行了克隆,并在毕赤酵母中进行了表达.以高温中性蛋白酶产生菌地衣芽孢杆菌XJT9503基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得高温中性蛋白酶(Tnp)基因的特异性片段,大小约为1 kb.通过EcoRI、NotI 双酶切后,将该基因连入毕赤表达载体pPIC9K,并整合到毕赤酵母SMD1168基因组中,构建的基因工程菌,进行甲醇诱导表达.结果表明,基因工程菌发酵72 h,有最大酶活,为19 U/mL;酶的最适作用温度为65℃,与原始酶的最适作用温度相符.证明研究成功克隆了高温中性蛋白酶基因,并在毕赤酵母中正确表达.