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Xinjiang Agricultural Sciences

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Optimization of ISSR-PCR System of Iris halophila by Uniform Design

DU Xin;DONG Yu-zhi;CHEN Hong   

  • Received:2008-03-25 Revised:2008-03-25 Online:2008-03-25 Published:2008-03-25

均匀设计优化喜盐鸢尾ISSR-PCR体系

杜欣;董玉芝;陈虹   

  1. 新疆农业大学林学院,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学林学院,乌鲁木齐,830052;新疆农业大学农业生,物技术重点实验室/新疆大学农学院,乌鲁木齐,830052





摘要： 以新疆野生喜盐鸢尾DNA为模板, 采用U20(54)和U12(34)均匀设计表,通过4因素5水平和4因素3水平两轮均匀优化试验,对影响ISSR-PCR扩增结果的一些因素如Mg2+ 、dNT P、引物以及TaqDNA聚合酶浓度以及循环数和退火温度等进行优化筛选, 建立了适合喜盐鸢尾的最佳ISSR-PCR反应体系:在25 μL反应体系中,包括2.5 μL 10×PCRBuffer ,2.0mmol/L M g2+,250 μmol/L dNTP,0.1 μmol/L 引物,0.5U TaqDNA 聚合酶,40 ng模板DNA.扩增程序为 :94℃预变性3 min;接着进行40个循环:94℃变性45 s,52.1℃退火30 s,72℃延伸1.5 m in;循环结束后,72℃延伸5 min,4℃保存.