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Xinjiang Agricultural Sciences

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cDNA library Construction and EST Analysis of Saussurea involucrata Kar.et Kit

WANG Bo;AI Xiu-lian;WANG Zhi-fang;LI Fang;LUO Ming   

  • Received:2008-01-25 Revised:2008-01-25 Online:2008-01-25 Published:2008-01-25

新疆雪莲全长cDNA文库构建及表达序列标签(ESTs)特性分析

王博;艾秀莲;王志方;李芳;罗明   

  1. 新疆农科院微生物所,乌鲁木齐,830091;新疆分析测试研究院,乌鲁木齐,830011;新疆农业大学,乌鲁木齐,830052





摘要： 以野生新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Kit)为研究材料,利用Creator SMARTTM cDNA Library Construction技术构建了雪莲全长cDNA文库,从野生雪莲中提取总RNA和mRNA , 用分离到的微量mRNA合成cDNA第1链.通过长距离PCR扩增得到足够量的双链cDNA .将SfiⅠ酶切后并纯化的cDNA片段连接到经SfiⅠ酶切的噬菌体λTripIEX2上, 并对噬菌体进行包装,建成cDNA的全长库.经大肠杆菌XL1-Blue平板检测,原始文库滴度达4.03×107(pfu/mL).随机挑选500个克隆进行序列测定,PCR鉴定结果显示多数插入片段均在500 bp以上.将所测序列经GenBank检索和生物信息学比较,共有56个序列为非冗余数据.其中有14个cDNA片段序列在GenBank上无明显的同源性,42个片段与已报道的基因有较高的同源性.这些EST数据为进一步筛选和克隆雪莲特异性表达基因提供了材料平台,为雪莲基因组数据增补了大量信息.