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Xinjiang Agricultural Sciences

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A High Efficient Gene Knockout Vector Constructed in Verticillium dahliae

MAO Jian-cai;ZHANG Ting;GAO Yun;SONG Wen;GAO Feng   

  • Received:2015-06-25 Revised:2015-06-25 Online:2015-06-25 Published:2015-06-25

一种新的大丽轮枝菌基因敲除载体的构建

毛建才;张婷;高云;宋雯;高峰   

  1. 石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室,新疆石河子,832000

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摘要： [目的]研究大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病基因的功能,构建一个便于筛选敲除转化子的高效基因敲除载体.[方法]通过普通PCR技术扩增得到绿色荧光蛋白基因(GFP),连接到pMD18-T载体上,测序验证,利用限制性内切酶HindⅢ将目的片段切下,连接到敲除载体pRF-HU2的多克隆位点上.通过电击转化法将载体转化到农杆菌EHA105中,利用农杆菌介导法(ATMT)转化到大丽轮枝菌.[结果]成功得到一种新的携带GFP筛选标记的大丽轮枝菌敲除载体,通过GFP基因的筛选,T-DNA随机插入转化子在荧光显微镜下呈现绿色,相反敲除转化子在荧光显微镜下不呈现绿色.[结论]构建了一种大丽轮枝菌基因新的高效敲除载体,利用该载体大大节省了筛选转化子所用的时间,为大丽轮枝菌功能基因的验证提供了技术平台.