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Xinjiang Agricultural Sciences

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Construction of Prokaryotic Expression Vector and Protein Expression in Cold Resistance gene AtCOR15a of Arabidopsis Thaliana

LI Jing;LI Xiao-rong;WANG Dong-mei;HAO Xiao-yan;LI Jian-pin;HUANG Quan-sheng;ZHANG Hua   

  • Received:2010-06-25 Revised:2010-06-25 Online:2010-06-25 Published:2010-06-25

拟南芥AtCOR15a抗寒基因原核表达载体的构建及蛋白表达

李静;李晓荣;王冬梅;郝晓燕;李建平;黄全生;张桦   

  1. 新疆农业科学院核技术生物技术研究所/新疆农作物生物技术重点实验室,乌鲁木齐,830091;新疆农业大学农学院,乌鲁木齐,830052;新疆农业科学院核技术生物技术研究所/新疆农作物生物技术重点实验室,乌鲁木齐,830091;新疆农业大学农学院,乌鲁木齐,830052





摘要： [目的]通过RT-PCR获得拟南芥AtCOR15a基因的ORF全长,经酶切、连接,以pET-28a(+)为原核表达载体.构建成pET28a-COR15a的重组表达载体,研究该基因在大肠杆菌中的表达情况,为进一步研究该基因的功能奠定基础.[方法]根据拟南芥AtCOR15a基因序列设计特异引物,利用RT-PCR的方法扩增目的基因,构建原核表达载体pET28a-COR15a,并将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,验证其蛋白表达量,并对其体系进行优化.[结果]AtCOR15a在大肠杆菌中成功表达,在37℃条件下诱导表达量最大,而30和16℃条件下蛋白表达量降低,IPTG浓度0.2～1.0 mmol/L对蛋白的表达量影响不大,并没有明显差异.但通过在不同诱导时间取样分析,结果发现加入IPTG后诱导5 h蛋白表达量最大,而8 h后逐渐降低.[结论]构建的原核表达载体在大肠杆菌中能高效表达,AtCOR15a融合蛋白分子量大约为19 kD,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.