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dGFP-GUS Genes Tagged of Verticillium Dahliae of Cotton in Xinjiang

KONG De-zhen;HUA Dong-lai;WANG Xiu-zhen;LIU Bu-cang;ZHU Jian-bo;WANG Ai-ying   

  • Received:2016-01-25 Revised:2016-01-25 Online:2016-01-25 Published:2016-01-25

dGFP-GUS基因标记新疆棉花黄萎病原菌的研究

孔德真;华东来;王秀珍;刘步仓;祝建波;王爱英   

  1. 新疆石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832000

摘要: [目的]研究棉花黄萎病原菌的入侵机理.[方法]以带有潮霉素抗性筛选基因的PUCCATPH载体以及pCAMBIA1304载体作为骨架,构建trpc启动子驱动的GFP-GUS基因的新疆棉花黄萎病菌表达载体1304-P-ORF,导入农杆菌GV3101和AGL-1中.通过农杆菌介导(ATMT)法分别转入新疆棉花黄萎病原菌VD-1和VD-278中,对表达效果进行检测.[结果]筛选的潮霉素B浓度为30 μg/mL,农杆菌AGL-1对黄萎病菌的转化效率比GV3101高40;.T0代经含有潮霉素B的PDA培养基筛选,获得了T1代转基因大丽轮枝菌VD-12株,VD-2 784株.通过GUS组织染色,在转基因VD-1和VD-278的菌丝和孢子中均可观察到GUS基因的表达.对转基因黄萎菌进行PCR分子检测,均可检测到GFP和潮霉索B基因.GUS-GFP和潮霉素B基因已成功转入新疆棉花黄萎菌VD-1和VD-278中.[结论]建立了新疆棉花黄萎菌的遗传转化体系,为进一步利用GFP-GUS基因研究新疆棉花黄萎菌对棉花侵染的过程奠定基础.