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Cloning and Expression Analysis of a Cotton GhSP1L cDNA

LI Rong;KOU Wei;LIANG Zhuo;XIE Quan-liang;LI Hong-bin   

  • Received:2015-09-25 Revised:2015-09-25 Online:2015-09-25 Published:2015-09-25

棉花GhSP1L基因克隆与表达分析

李榕;寇伟;梁卓;谢全亮;李鸿彬   

  1. 石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832003;石河子大学生命科学学院,新疆石河子832003;石河子大学农业生物技术重点实验室,新疆石河子832003

摘要: [目的]棉花Spiral1-LIKE(SP1L)基因(GhSP1L)的克隆、功能序列分析及原核表达.[方法]通过RT-PCR从棉纤维中克隆GhSP1L基因,进行GhSP1L蛋白的功能结构域分析,构建原核表达载体pET28a-GhSP1L,进行蛋白体外诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况;RT-PCR检测GhSP1L基因的表达特征.[结果]从陆地棉纤维组织中克隆得到GhSP1L基因的全长cDNA,其开放读码框为318 bp,编码106个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为11.76kDa.对氨基酸序列进行生物信息学分析,其N端和C端较为保守,含有SCOP结构域,属于SP1L家族蛋白,能够在其他微管蛋白协助下与微管结合,SPR1的定位可能与其结合的微管结合蛋白相关.构建了pET28a-GhSP1L原核表达载体,并通过体外诱导表达后获得分子质量约为12 kDa左右的重组蛋白GhSP1L;半定量RT-PCR结果表明,GhSP1L基因开花后3d的纤维组织中表达量较高.[结论]GhSP1L基因的克隆、序列分析和表达,重组蛋白的诱导表达,为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础.