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Xinjiang Agricultural Sciences

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Real-time Quantitative PCR Was Used to Detect Transgenic Sheep Exogenous Gene Copy Number

  • Received:2015-08-25 Revised:2015-08-25 Online:2015-08-25 Published:2015-08-25

实时定量PCR检测转基因绵羊拷贝数

赵帅;王立民;王聪慧;唐红;张宾;郭延华;张译元;赵兴旺;丁新平   

  1. 石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000;新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子832000;新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子,832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子,832000;石河子石总场畜牧兽医服务中心,新疆石河子,832011;新疆西部牧业股份有限公司紫泥泉种羊场,新疆石河子,832000

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摘要： [目的]利用高通量、快速、灵敏的实时荧光定量PCR法,检测转类胰岛素样生长因子1-红色荧光蛋白基因(insulin-like growth factor 1-red fluorescent protein,IGF1-RFP)绵羊中外源基因的拷贝数.[方法]以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为绵羊的内源参照基因,梯度稀释法.[结果]分别获得RFP和GAPDH基因的Q值与起始模板数的相关性标准曲线,R2分别为0.999和0.999,相关性高.通过比较目的基因RFP和GAPDH起始模板数,得到外源基因在转基因绵羊中的拷贝数.编号0152、0216、0217、0218的转基因绵羊拷贝数分别为3、1、1、1.[结论]以IGF-Ⅰ转基因细毛羊为研究对象,针对外源基因序列和内源参照基因序列设计特异性引物,利用实时荧光定量PCR法对IGF-Ⅰ转基因细毛羊外源基因的拷贝数进行检测,并且准确检测外源基因的拷贝数.