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A Genomic DNA Extraction Method of Korla Fragrant Pear for SCoT Analysis

HE Shi-yu;NIU Jian-xin   

  • Received:2014-08-25 Revised:2014-08-25 Online:2014-08-25 Published:2014-08-25

适合库尔勒香梨SCoT分析用的DNA提取方法研究

和世玉;牛建新   

  1. 石河子大学农学院/园艺作物栽培生理与种质资源利用重点实验室,新疆石河子,832003

摘要: [目的]有效利用SCoT分子标记法对库尔勒香梨优良营养系中相关基因,获得高质量基因组DNA,对目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法进行比较研究,研究最适合库尔勒香梨SCoT分析的DNA提取方法.[方法]采用改良CTAB法,改良SDS法和试剂盒法从库尔勒香梨优良营养系的叶片中提取基因组DNA.采用NANODROP 2000核酸仪检测DNA浓度和纯度,并用1.2;琼脂糖凝胶电泳检测其完整性.以3种方法提取的基因组DNA为模板分别进行SCoT-PCR.[结果]改良CTAB法提取的基因组DNA的浓度为600 ~1 600 ng/μL,A260/A280为1.8 ~2.0,A260/A230<2.0,电泳结果显示:有一条清晰的带,有拖尾现象,点样孔发亮;改良SDS法提取的基因组DNA的浓度为600 ~ 900 ng/μL,A260/A280为1.8 ~2.0,A260/A230为1.9 ~2.2,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾现象只有一个点样孔发亮;试剂盒法提取的基因组DNA的浓度为100 ~ 200 ng/μL,A260/A280为1.8 ~2.0,A260/A230为2.2 ~2.5,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾,无点样孔发亮现象,蛋白、多糖、酚类物质、RNA等去除彻底;以3种方法提取的基因组DNA为模板进行SCoT-PCR,PCR产物电泳结果显示:试剂盒法提取的DNA可以扩增出7条清晰明亮的带,改良CTAB法提取的DNA只能扩增出4条清晰的带,改良SDS法提取的DNA只能扩增出2条带.[结论]比较目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法,综合成本高低,毒性大小,步骤多少,时间长短,试剂盒法是最适合提取库尔勒香梨优良营养系叶片基因组DNA的方法.